Действующие вещества
Культурально-морфологические характеристики
Trichodermaveride, штамм 471 – один из штаммов гриба Trichoderma veride. Род Trichoderma – анаморфа рода Hypocrea[3][1].
Систематическое положение: домен Эукариоты (Eukaryota), царство Грибы (Fungi), тип Аскомицеты (Ascomycota), класс Эуаскомицеты (Euascomycetes) или Sordariomycetes, порядок Гипокрейные (Hypocreales), семейство Hypocreaceae, род Trichoderma[1].
Trichoderma veride, штамм 471, как и другие штаммы рода Trichoderma обладает рядом отличительными морфологических признаков. Однако внешность колоний различных штаммов часто сходен и труден в использовании для идентификации[1].
Основные морфологические признаки рода Trichoderma:
- едва различимые запахи плесени и затхлости, исключение штаммы Trichoderma viride и Trichoderma atroviride, их аромат напоминает запах кокоса;
- цвет диффузного пигмента слабо варьируется от заметно яркого зеленовато-желтого до тусклого зеленого, иногда окраска пигмента отсутствует или присутствуют красноватые оттенки;
- тип разветвления конидиеносцев: скрученные пустулы, правильно мутовчатое или более беспорядочное, широкое и прямое, узкое и изогнутое;
- верхушка конидиеносцев может заканчиваться стерильным отростком, различного типа: прямой, извитый и спиралевидный;
- фиалиды могут быть объединены в правильные мутовки, быть сдвоенными, чередующимися или иметь менее правильное расположение;
- фиалиды по форме могут быть типично короткие или округлые (секция Pachybasium) или продолговатые и почти цилиндрические (секция Longibrachiatum);
- конидии – форма от сферической до эллиптической, яйцевидная или коротко цилиндрическая, число возможных вариаций размера невелико, поверхность обычно гладкая, редко (у Trichoderma viride, T. saturnisporum и T. Ghanense – пузырчатая или с выступами внешней стенки), пигментация – от бесцветной до зеленого, серого или коричневого;
- хламидоспоры образуются не на всех питательных средах, форма обычно сферическая или эллипсоидная, термальные или интеркалярные, бесцветные, желтоватые или зеленоватые, гладкостенные, диаметр – 6–15 мкм[1].
Физиолого-биохимические характеристики
Грибы рода Trichoderma – аэробы, сапротрофы. В качестве источников углерода предпочтительнее: глюкоза, фруктоза, сахароза, крахмал[4].
Для роста Trichoderma на буферизованных средах с pH 4,2–4,3 в качестве источника азота подходят L-аланин, L-аспарагиновая кислота, L-глутаминовая кислота. Как и на все виды рода, Нитрит натрия оказывает токсическое действие на культуру данного штамма. Отмечается лучший рост на средах с ионами аммония, чем на средах с нитратами. Предпочтительнее аммиачна селитра и сульфат аммония[4].
Оптимальной кислотность среды для Trichoderma veride, штамм 471 варьирует в пределах pH 3,7–4,7. Оптимальная температура роста – от + 22ºCдо +34ºC[4].
Действие на вредные организмы
Trichoderma veride, штамм 471, как и все грибы рода Trichoderma активно подавляют рост и развитие грибов рода Bipolaris и рода Alternaria, а также видов Olpidium brassicae, Pythium debaryanum, Rhizoctonia solani J.G. Kuhn, Thanatephorus cucumeris и многих других (всего около 60).Виды рода Fusarium более устойчивы к воздействию данного штамма[2][3].
Кроме того, штамм является антагонистом бактерий, способствующим развитию сосудистого бактериоза крестоцветных культур (бактерия Xanthomonas campestris pv. campestris (Pammel) Dowson)[3].
Гиперпаразитическая активность штамма проявляется благодаря целому комплексу метаболитов, выделяемым штаммом и подавляющим жизнедеятельность фитопатогенных микроорганизмов[1].
Действие на растения
Trichoderma veride, штамм 471 обладает росторегулирующей активностью по отношению к растениям. Присутствие гриба в ризосфере растений способствует интенсификации поглощения растениями микро- и макроэлементов, стимулированию развитию на корнях азотофиксирующих бактерий[4].
Применение
Trichoderma veride, штамм 471 – действующее вещество биологического фунгицида Триходерма Вериде 471, СП. Препарат эффективен на многих овощных (огурец, томат, капуста) культурах против широкого спектра заболеваний[3].
Токсикологические свойства и характеристики
Trichoderma veride, штамм 471 по критериям токсичности неопасен для теплокровных животных[3].
Классы опасности
Препараты, изготовленные на основе Trichoderma veride, штамм 471 характеризуются:
- 4 класс опасности для пчел (малоопасные);
- 3 класс опасности для человека (малоопасные)[3].
Допуски к применению
Применение в водоохраной зоне водоемов запрещено[3].
Авиационная обработка разрешена[3].
Получение
Trichoderma veride, штамм 471, как и прочие виды данного рода, обычно выделяют из почвы. Они могут спорулировать на древесине, шляпках культурных грибов, на лесных грибах, на влажных стенах зданий, а также как эндофиты в стволах деревьев влажного тропического леса[1].
Промышленное культивирование производится двумя способами: глубинном и поверхностном[1].
Глубинное культивирование
Глубинное культивирование производится в колбах Эрленмейера или ферментере. В первом случае необходимо, что бы объем питательной среды не превышал 20% от объема колбы. Оптимальная скорость перемешивания – 150 об/мин[4].
Условия для накопления максимальной биомассы в ходе культивирования соответствуют физиолого-биохимическим характеристикам, описанным выше[4].
Для получения культуральной жидкости, используемой в качестве действующего вещества биологического пестицида необходимо индуцировать процесс образования конидий и хламидиоспор, совмещая его с автолизом мицелия. Для этого необходимо создание дополнительных условий:
- в питательную среду добавляют минеральные элементы питания, в частности, кальций;
- устанавливают определенный режим освещения: оптимальным является синий цвет в области ближнем к ультрафиолету, чередование световой и темновой фазы должно происходить через каждые 12 часов;
- кратковременное отключение подачи воздуха в ферментер с одновременным отключением света;
- изменение соотношения углерода и азота в составе питательной среды, в сторону значительного преобладания углерода (160:1) или до полного исчезновения азота[4].
Отмечается, что более высокие концентрации источника углерода и меньшая разница в соотношении углерода к азоту для вида Trichoderma viride увеличивает выход мицелия и уменьшает выход конидий. Внезапное исчезновение азота в среде стимулирует образование конидий у Trichoderma аtroviride[4].
Глубинное культивирование с целью получения препарата на основе клеток гриба продолжается обычно от четырех до семи суток[4].
Поверхностное культивирование
При культивировании поверхностным способом грибы Trichoderma veride, штамм 471 выращивают на поверхности плотной, но сыпучей среды или в тонком слое жидкой среды. Кислород поступает к организмам непосредственно из газовой воздушной фазы[4].
При подборе питательной среды используют комплексные натуральные питательные среды, имеющие в составе источники углерода и азота. Российский опыт выращивания рекомендует использовать отходы лесоперерабатывающей и сельскохозяйственной промышленности (кора и древесная зелень пихты, кора лиственницы, вегетативная часть топинамбура). Зарубежные специалисты применяют пшеничные и кукурузные отруби, отходы переработки манго и агавы[4].
При поверхностном культивировании продолжительность процесса увеличивается в два –три раза и составляет от семи до пятнадцати суток. Однако титр конидий в среднем оказывается на порядок выше, чем при глубинном культивировании. Кроме того, особую важность приобретает влажность субстрата. Отмечается, что изменение влажности на 5–10 % от оптимальной приводит к уменьшению титра конидий в 5–10 раз[4].
2. Бондарь П. Н. Штаммы грибов рода Trichoderma (Pers: Fr) как основа для создания биопрепаратов защиты растений и получения кормовых добавок. Автореферат диссертации на соискание ученой степени кандидата биологических наук, Москва, 2011 – 22 с.
3. Государственный каталог пестицидов и агрохимикатов, разрешенных к применению на территории Российской Федерации, 2021 год. Министерство сельского хозяйства Российской Федерации (Минсельхоз России)
4. Зиганшин Д.Д., Сироткин А.С. Особенности глубинного и поверхностного культивирования грибов Trichoderma для получения биопрепаратов на основе клеток гриба.Вестник технологического университета. 2017. Т.20, №10 с 155 – 158