При окрашивании фиксированных клеток бактерий кристаллвиолетом или генцианвиолетом, с последующим протравливанием раствором Люголя, промывкой спиртом, водой и докрашивания 1%-ным водным фуксином грамотрицательные бактерии приобретают красный цвет. Подробнее технология окрашивания описана в статье «Окрашивание бактерий по Граму».
Особенности структуры и химического состава клеточной стенки
Клеточная стенка грамотрицательных бактерий многослойна, толщиной 14–17 нм. Внутренний слой клеточной стенки представлен муреином. На его долю приходится от 1 до 10% ее сухой массы.
Структурные микрофибриллы пептидогликана грамотрицательных бактерий сшиты менее компактно. Поры в их пептидогликановом слое значительно шире, чем в молекулярном каркасе грамположительных бактерий.
Внешний слой клеточной стенки грамотрицательных бактерий (наружная или внешняя мембрана) образован фосфолипидами, липопротеинами и белками.
По строению наружная мембрана характеризуется типичной организацией, характерной для элементарных мембран. Основная фракция наружной мембраны – липиды. Они составляют в среднем 22% сухой массы клеточной стенки.
В наружной мембране находятся трансмембранные белки, которые пронизывают мембрану насквозь. Они представляют собой заполненные водой каналы и гидрофильные поры в липофильной мембране и названы поринами. Существует несколько типов поринов, осуществляющих транспорт через мембрану гидрофильных низкомолекулярных веществ.
Одна из отличительных особенностей грамотрицательных бактерий – отсутствие в клеточной стенке тейхоевых кислот.
Компоненты клеточной стенки грамотрицательных бактерий разделены электронно-прозрачным слоем и четко отделены от цитоплазматической мембраны. Пространство между цитоплазматической и наружной мембраной получило наименование – периплазматическое пространство.
В периплазматическом пространстве расположены белки, такие как протеиназы, нуклеазы, периферические белки цитоплазматической мембраны, рестриктазы, пермеазы (связующие белки, участвующие в переносе некоторых субстратов в цитоплазму).
Грамотрицательных фитопатогенные бактерий
В девятом издании определителя бактерий Берджи грамотрицательные эубактери, имеющие клеточные стенки, относятся к типу Gracilicutes. К их числу принадлежат многие фитопатогенные бактерии:
- Agrobacterium tumefaciens – возбудитель бактериального рака винограда;
- Erwinia amylovora – возбудитель заболевания Ожог плодовых деревьев, идентифицируется в патокомплексе корнееда сахарной свеклы;
- Peсtobacterium (Erwinia) carotovorum subsp. atrosepticum – возбудитель заболеваний: черная ножка томата, черная ножка картофеля. Паразитирует на многих видах семейства Пасленовых;
- Pseudomonas chlororaphis – фитопатоген выявлен в патокомплексе бактериальной формы заболевания – корнееда сахарной свеклы;
- Pseudomonas syringae pv.coronafaciens – возбудитель заболевания ореольный бактериоз овса;
- Xanthomonas campestris pv. campestris – возбудитель заболевания сосудистый бактериоз крестоцветных культур.