В основе всех серологических реакций лежит специфическое взаимодействие антитела и антигена.

Типы серологических реакций

Серологическими называют реакции иммунодиагностики вирозов и заболеваний других патогенных этиологий, для постановки которых используются сыворотки (serum),содержащие антитела (антисыворотки). В серологической реакции один ингредиент (компонент) всегда известен. Применяются такие реакции в двух случаях:

  • для определения неизвестного антигена (вирус, бактерия, токсин) с помощью известного антитела (сыворотки);
  • для определения антитела в сыворотке с помощью известного антигена.

При диагностике фитопатогенных вирусов используют два типа серологических реакций:

  • преципитации – образование специфического осадка при взаимодействии антител с антигеном, который представляет собой молекулы белка или полисахаридов. Если вирионы, определяемого вируса имеют палочковидную форму, то осадок рыхлый хлопьевидный, при изометрических вирионах – плотный зернистый;
  • агглютинации (склеивания) – проводятся с неочищенным соком растений, в котором вирионы адсорбированы на хлоропластах, обрывках клеточных стенок, митохондриях и других клеточных компонентах. Они вовлекаются в серологическую реакцию, образуя хорошо заметный осадок в виде сгустков – агглютинат.

Методы серодиагностики

Разработано множество методов серодиагностики, основанных на вышеуказанных типах реакций, приведем примеры только некоторых:

  1. Капельный метод – на стекло наносят каплю диагностической сыворотки и каплю нормальной сыворотки (без антигена). К каждой добавляют по капле сок исследуемых растений. Капли выдерживают во влажной камере при +22ºCв течение 4 минут. Нормальная сыворотка – контроль. Реакция положительная, если в капле с антисывороткой виден четкий осадок, отсутствующий в капле с нормальной сывороткой.
  2. Латекс-метод – основан на добавлении к антисыворотки полимерного соединения латекса. Оно адсорбируется на поверхности антител и способствует агглютинации при взаимодействии антиген – антитело и усиливает видимую реакцию. Чувствительность метода по сравнению с капельным возрастает в 100 и более раз. Техника такая же, как при капельном методе.
  3. Реакция преципитации в агаре по Ухтерлони – основана на различной скорости диффузии в агаре молекул антигена и антител. Агар высшей очистки тонким слоем наносят на стеклянные пластинки слоем около 3 мм. После застывания в слое агара вырезают лунки диаметром 5 мм: центральную и на расстоянии 1–1,5 см от нее 4–6 лунок. В центральной размещают антисыворотку, в остальных – вирусный препарат или сок исследуемого растения. Растворы антигена и антител диффундируют навстречу друг другу. При положительной реакции между центральной и периферическими лунками появляется дуга или прямая линии преципитации. Она хорошо видна в прозрачном агаре на темном фоне при боковом освещении.
  4. Нейтрализация инфекционности – вирус смешивают со специфической сывороткой, которая резко снижает его инфекционность без нарушения структуры. Метод используется при разделении вирусов в смешанных инфекциях. Кроме того, данный прием позволяет изучать серологическое родство между вирусами, передаваемыми только тлями.

(c) Справочник AgroXXI