Метод растений-индикаторов широко используется на практике для идентификации вирусов и вирозов наряду с иммунодиагностикой вирозов и молекулярно-биологической диагностикой вирозов.

Применение метода растений-индикаторов

Метод растений-индикаторов применяется ко всем известным фитовирусам. Вирусы с широким кругом поражаемых растений диагностируются на многих тест-растениях. Некоторые узкоспециализированные вирусы – на растениях одного семейства или одного рода.

Метод растений-индикаторов применяется:

  • для точного определения вида вируса;
  • для диагностики смешанных вирусных инфекций;
  • для выделения отдельных видов вирусов;
  • для размножения вирусов в целях получения очищенных вирусных препаратов, используемых для анализа морфологии вирионов и получения антисывороток;
  • для выявления штаммовых различий вида вируса.

Кроме того, тест-растения с местной некротической реакцией обеспечивают возможность проведения биологического титрования вирусов – количественного определения относительной концентрации вирионов в соке, суспензии, экстракте.

Методика работы

Учреждения, занимающиеся первичным семеноводством картофеля, широко используют заражение отдельных листьев растений-индикаторов, реагирующих на вирусы локальными некрозами. Для этого листья размещают под светоустановками во влажных камерах с определенным температурным режимом. Выбор режима зависит от вида вируса. Эта модификация метода используется, в частности, для вируса табачной мозаики. В качестве тест-растений применяются табак клейкий (Nicotiana glutinosa) и табак обыкновенный (Nicotiana tabacum).

Для заражения используют молодые, интенсивно растущие растения. Двудольные растения-индикаторы заражают в фазу двух-трех настоящих листьев. В отдельных случаях – в фазу развития примордиальных листьев (для вируса мозаики люцерны на фасоли) и семядольных листьев (для вируса некроза табака на огурце).

Однодольные растения (злаковые) – в фазу одного-двух листьев. Чувствительность к вирусам повышается при помещении растений-индикаторов на трое суток в затенение.

Заражение обычно производят механическим путем. Для этого натирают листья соком исследуемого растения, приготовив предварительно из него инокулюм. Его готовят путем растирания листьев исследуемого растения в продезинфицированной ступке. Для стабилизации вируса добавляют натриево-калийный фосфат, уголь, аскорбиновую кислоту, сульфит натрия, гипосульфит натрия, триогликолиевую кислоту, кофеин и другие химические вещества, способствующие сохранению инфекционности вируса.

Для увеличения «ворот инфекции» в инокулюм и на поверхность листа добавляют абразивные вещества (карбид кремния, окись алюминия, целит).

Листья натирают легкими движениями с помощью поролоновой губки, смоченной в инокулюме. Через несколько минут его смывают водой из пульверизатора. После внесения инфекции растение выдерживают в затененном месте в течении 12–24 часов, для снижения последствий травмирования.

Наблюдения за тест-растениями начинают через один или два дня после заражения и проводят регулярно в течении четырех недель. При этом обращают внимание как на инокулированные листья, так и на отрастающие. Признаки местной реакции появляются спустя 3–12 суток после инокуляции, а системной – через 7–30 дней.

Таблица реакций растений-индикаторов на вирусы.
ПатогенРастение-индикаторРеакция растения-индикатора
Зерновые культуры
Вирус мозаики костраКукуруза (сорт GoldenGiant, Днепровский 756)L:LLN, S:StN, LeN
Мари степная (Chenopodium murale)S:M
Картофель
X – вирус картофеляДурман (Datúra stramónium)В зависимости от штамма:

  1. S: M
  2. L:LLN, S:M, N
Овощные культуры
Вирус табачной мозаикиТабак клейкий(Nicotiana glutinosa)L:LLN
Дурман (Datúra stramónium)L:LLN
Вирус бронзовости томатовПетуния(Petunia hybrida)L:LLN
Табак клейкий(Nicotiana glutinosa)L:LLN, S:N,VN
Вирус обыкновенной мозаики огурцаТабак клейкий(Nicotiana glutinosa)S:M, LeDis
Табак обыкновенный (Nicotiana tabacum).S:M, LeDis
Сахарная свекла
Вирус желтухи свеклыМарь головчатая (Chenopodium capitatum)S:IV,Chl,Stu, VC
Марь многолистная (Chenopodiumfoliosum)S:LeN, Stu, LeCu
Вирус мозаики свеклыЛебеда садовая (Atriplex hortensis)L:LLN,S:Sp, LeCu,LeN
Плодовые культуры
Вирус мозаики яблониОгурец (Cucumis sativus)L:LLN, S:M
Фасоль (Phaseolusvulgaris)L:LLN
Вирус хлоротической пятнистости листьев яблониМарь киноа (Chenopodium quinoa)L:LLN, S:Ri

Примеры различных типов тест-растений на вирусы

Отдельные примеры реакции растений-индикаторов на вирусы приведены в таблице. Использованы следующие условные обозначения симптомов вирусных заболевания, проявляющихся на растениях-индикаторах:

Chl– хлоротичный, Dis– деформация, En– энации,

IV– междужилковый, L– местная реакция, LeAb– опадение листьев,

LLN– местные повреждения, LeChl– хлороз листьев, LeDis– деформация листьев,

LeN– некроз листьев, M– мозаика, N– некроз, NQL– некротический дубовидный рисунок, Ri– кольца, S– системная реакция, Sp– пятнистость, StN– некроз стебля,

Stu– задержка роста, Y– желтый, VN– некроз жилок, VC– посветление жилок,

LeCu– курчавость листьев.


(c) Справочник AgroXXI