Перспективность иммунодиагностических методов в целях диагностики заболеваний, а также внутривидовой и межвидовой дифференциации фитопатогенов оценена фитопатологами достаточно давно. Отмечается, что первоначально эти методы использовались только для идентификации фитовирусов.

История развития

Первые антисыворотки к грибам были получены в 1903 году. В 1937 году делались попытки диагностировать с помощью иммунологических реакций виды грибов Рода Tilletia, паразитирующих на растениях семейства злаковых.

Систематическое использование иммунодиагностики приходится на 60-е годы прошлого столетия. В 1961 году результаты развития первого этапа иммунодиагностических методов были обобщены Кровэлом. Отмечается, что в это время иммунодиагностические методы служили в основном для подтверждения таксономического статуса патогена, установленного с помощью традиционных методов фитопатологии и микробиологии. Одновременно они позволяли выявить внутривидовые отличия фитопатогенов, установив различные серотипы у патогенов, принадлежащих к одному типу.

В 70–80 годах прошлого века в практику исследования фитопатогенов, в том числе вирусов, ввели метод иммуноферментного анализа, что значительно расширило возможности иммунодиагностики заболеваний растений.

Принципы иммунодиагностики

Все методы иммунодиагностики основываются на способности антител связывать антигены. Следовательно, перед любым иммунологическим тестом стоит задача – обнаружения и (или) определения количественной характеристики взаимодействия диагностических (специфичных) антител с детектируемыми (гомологичными) антигенами.

Эта задача решается различными способами. Комплексы «антигенантитело» обнаруживаются визуально, поскольку способны формировать видимые невооруженным глазом либо различимые под микроскопом преципитаты в жидкой среде или геле.

Антитела, участвующие во взаимодействии, могут соединяться химически с флуоресцентным красителем. Комплекс «антигенантитело» обнаруживается под флуоресцентным микроскопом.

Антитела с радиоактивной меткой используют для количественного определения антигена. Антитела, маркированные коллоидным золотом, используют для иммуногистохимических исследований.

Методы иммунодиагностики

Наиболее распространены на практике методы:

  1. Серологические методы иммунодиагностики вирозов – основаны на иммуногенных и антигенных свойствах фитовирусов. Они позволяют установить вид вируса, генетические взаимоотношения между вирусами, определить концентрацию и локализацию вируса в клетках и тканях растений. Методы широко применимы в медицине, ветеринарии и фитопатологии в целях диагностики вирусных, микоплазменных и бактериальных заболеваний. Для изучения вирусов серологический метод впервые применил М. Дворак в 1927 году. Дальнейшее развитие он получил в работах Л.С. Дунина и Н.Н. Поповой (1937), предложившими капельный метод серодиагностики.
  2. Иммуноферментный анализ вироза (ИФА) или ELISA-тест (Ensyme-linked immunosorbent assay) – это высокочувствительный метод иммунодиагностики. В его основе лежит использование связанных с энзимами антител для определения специфических антигенов. Применяется для диагностики вирусов со всеми возможными формами вирионов. Широко применяется в ветеринарии, медицине, фитопатологии. Используется для выявления бактерий, грибов и вирусов во всех органах растений, в том числе в семенах и плодах.
  3. Иммунофлуоресцентный анализ – люминесценция в ультрафиолетовом свете под микроскопом биологического объекта, содержащего изучаемый антиген. Изучаемый образец предварительно обрабатывается специфическими антителами, меченными флюорохромом.
  4. Иммуноблоттинг (Вестерн блоттинг) – высокочувствительный способ исследования белков. Применяется для диагностики фитопатогенных микроорганизмов и вирусов по их белковым антигенам.
  5. Иммунологический анализ в тканях растений – метод иммунных отпечатков (Tissue Blot Immunoassay – TBI), позволяющий с большой точностью локализовать антигены фитопатогенных организмов (главным образом вирусов) в растительных тканях.

(c) Справочник AgroXXI