В 2012 году исполнилось 120 лет со дня открытия вирусов русским ученым Дмитрием Иосифовичем Ивановским. С самого начала изучения данной группы патогенов и вызываемых ими инфекций встала проблема идентификации вируса. Среди множества диагностических приемов, наиболее точными и обоснованными являются методы иммунодиагностики вироза, основанные на взаимосвязи «антителоантиген» и на использовании сывороток (serum), содержащих антитела – антисывороток.

Получение антисыворотки

Диагностические сыворотки получают путем введения очищенного препарата вируса (растворимого антигена) в организм различных видов животных (кролика, лошади, козы, барана). Чаще всего используют кроликов, обладающих высокой активностью к образованию антител. При производстве большого количества антисыворотки используют лошадей.

Существуют различные схемы для приготовления относительно чистых препаратов фитовирусов. Очистка основана на методах дифференциального центрифугирования – чередования низкоскоростного центрифугирования сока (2–10 тыс. об/мин) с ультрацентрифугированием (20–60 тыс. об/мин), гельфильтрации, центрифугирования в градусе плотности.

В зависимости от видовой принадлежности вируса варьируют схемы введения антигена (число инъекций и интервалы между ними). По завершении цикла инъекций антигена, у животного берется кровь для выделения из нее сыворотки. После соответствующей обработки сыворотка разливается по ампулам, производится лиофильная сушка (в замороженном состоянии). В дальнейшем готовый препарат используется для диагностических целей.

Способы определения содержания антител в антисыворотке

Содержание антител в антисыворотках определяется:

  • способом введения антигена – внутривенно, внутримышечно, подкожно, в лимфатические узлы;
  • числом инъекций и количеством введённого антигена;
  • интервалами между инъекциями
  • введением соединений, стимулирующих образование антител в организме животного.

Антисыворотки с предельным разведением, при котором наблюдается реакция с антигеном, получают после продолжительного введения антигена (3–4 инъекции с интервалами в 2–4 недели). Для повышения иммуногенности применяют адъювант Фрейнда, в составе которого содержаться убитые и высушенные клетки Mycobacterium butyricum (0.05%), минеральное масло (85%), эмульгирующее вещество – маннидмоноолеат (15%).

(c) Справочник AgroXXI