Методы иммунодиагностики вирозов и болезней растений других этиологий основаны на свойствах и взаимоотношении антигенов и антител.

Вещества-антигены

Большинство антигенов относится к белкам, но антигенными свойствами обладают полисахариды, нуклеиновые кислоты. Антигеном может быть практически любое полимерное соединение, имеющие функциональные группы, распознаваемые антителами.

Участки иммуногенных макромолекул или функциональные группы других иммуногенов, определяющие специфичность антител, вырабатываемых к ним, именуются антигенными детерминантами. Если одна молекула антитела имеет несколько детерминант, то он является поливалентным.

Гаптены – небольшие органические молекулы и пептиды. Они не являются иммуногенными, но ковалентно связаны с белковой молекулой и поэтому становятся антигенными детерминантами. Образующиеся в ответ антитела способны связывать и коньюганты гаптенов с белком, и свободные гаптены.

В качестве иммуногенных антигенов растительных вирусов и микроорганизмов используются разнообразные структуры и метаболиты данных возбудителей. При введении лабораторным животным вирусов, целых клеток или клеточных стенок, растворимых или солюбилизированных высокомолекулярных антигенов, экстрацеллюляторных секретов, экстрактов из грибов и бактерий получают антисыворотки с поликлональными антителами.

Прямых указаний на то, использование какого типа иммуногена способствует повышению специфичности антисыворотки нет. В целом считается, что введение очищенных антигенов приводит к синтезу более специфичных антител.

Типы антигенов

Для иммунодиагностики вирозов и заболеваний других патогенных этиологий используют два типа антигенов:

  • корпускулярный антиген;
  • растворимый антиген.

Корпускулярный антиген

Корпускулярные антигены – это целые клетки, пораженные патогеном. В частности, это могут быть лимфоциты, плазмоциты, клетки, пораженные вирусами, опухолевые клетки, бактериальные клетки. Они могут быть живыми или убитыми (инактивированными). При инактивации пользуются методами, не вызывающими изменений специфичности и снижения иммуногенных свойств.

Растворимый антиген

Изучение природы, функций и иммуногенности отдельных антигенных веществ, а также для выявления антител к отдельным антигенам, возникает необходимость получения антигена в чистом виде. Этот процесс является многоступенчатым и требует комбинации различных методов.

Растворимые антигены прокариот и эукариот получают экстрагированием разнообразными растворителями целых или дезинтегрированных клеток. Антигены экстрагируют дистиллированной водой, буферами, растворами кислот, щелочей. Такие экстракты являются сложной смесью антигенов и дополнительных балластных веществ.

Антигены выделяют и очищают фракционированием различными методами: избирательным осаждением солями тяжелых металлов, гельфильтрацией, аффинной хроматографией с импользованием моноклональных антител.

Высокая степень очистки антигенов повышает точность идентификации патогена и эффективность диагностического метода.

(c) Справочник AgroXXI