Основные методы диагностики вирозов
Диагностические приемы, используемые при идентификации вируса, во многом отличаются от приемов, применяемых при работе с патогенами грибной и бактериальной природы. Это объясняется морфологическими и биологическими особенностями вирусов: ультрамикроскопическими размерами, отсутствием способности к размножению на искусственных питательных средах, способность заражать растения разнообразных ботанических семейств, антигенная активность и прочее.
К основным методам диагностики фитовирусов относят:
- визуальный метод диагностики вирозов;
- установление инфекционность заболевания;
- иммунодиагностика вирозов, в том числе серологический метод иммунодиагностики вирозов и иммуноферментный анализ вирозов;
- методы молекулярно-биологической диагностики вирозов, в том числе метод молекулярной гибридизации, метод полимерной цепной реакции с обратной транскрипцией;
- метод растений-индикаторов;
- электронная микроскопия;
- анатомо-цитологический метод;
- метод включений.
Методы диагностики делят на прямые (электронная микроскопия, метод включений) и косвенные (метод растений-индикаторов, серологический, люминесцентный анализ).
Наиболее результативными в вирусологии являются: метод растений-индикаторов, метод электронной микроскопии, серологический, метод включений, установление инфекционности посредством переносчиков (для вирусов, не передающихся механическим путем).В последнее время широко используются молекулярно-генетические методы (полимеразная цепная реакция (ПРЦ).
Часто для более точной диагностики применяют комплекс методов.
Этапы диагностики
Диагностика основывается на данных об основных свойствах вируса и в определенной мере на наблюдении за развитием заболевания.
Для диагностики вирусных болезней растений предлагается использовать 10 этапов:
- Определение вида зараженного растения.
- Изучение симптомов заболевания.
- Оценка распространенности заболевания, условий его развития и характера распределения.
- Изучение инфекционности путем инокуляции сока, передача векторами, прививкой или повиликой.
- Инокуляция или прививка серии растений-индикаторов с целью определения круга растений-хозяев вируса и его выделения.
- Определение сохранения инфекционности сока после хранения, разведения и прогревания при различных температурах в течении 10 минут.
- Исследования с помощью электронного микроскопа.
- Серологическое тестирование.
- Изоляция, очистка, определение физико-химических свойств, приготовление антисыворотки.
- Инокуляция здоровых растений того же вида.