Получение антисыворотки
Диагностические сыворотки получают путем введения очищенного препарата вируса (растворимого антигена) в организм различных видов животных (кролика, лошади, козы, барана). Чаще всего используют кроликов, обладающих высокой активностью к образованию антител. При производстве большого количества антисыворотки используют лошадей.
Существуют различные схемы для приготовления относительно чистых препаратов фитовирусов. Очистка основана на методах дифференциального центрифугирования – чередования низкоскоростного центрифугирования сока (2–10 тыс. об/мин) с ультрацентрифугированием (20–60 тыс. об/мин), гельфильтрации, центрифугирования в градусе плотности.
В зависимости от видовой принадлежности вируса варьируют схемы введения антигена (число инъекций и интервалы между ними). По завершении цикла инъекций антигена, у животного берется кровь для выделения из нее сыворотки. После соответствующей обработки сыворотка разливается по ампулам, производится лиофильная сушка (в замороженном состоянии). В дальнейшем готовый препарат используется для диагностических целей.
Способы определения содержания антител в антисыворотке
Содержание антител в антисыворотках определяется:
- способом введения антигена – внутривенно, внутримышечно, подкожно, в лимфатические узлы;
- числом инъекций и количеством введённого антигена;
- интервалами между инъекциями
- введением соединений, стимулирующих образование антител в организме животного.
Антисыворотки с предельным разведением, при котором наблюдается реакция с антигеном, получают после продолжительного введения антигена (3–4 инъекции с интервалами в 2–4 недели). Для повышения иммуногенности применяют адъювант Фрейнда, в составе которого содержаться убитые и высушенные клетки Mycobacterium butyricum (0.05%), минеральное масло (85%), эмульгирующее вещество – маннидмоноолеат (15%).