Между антигенами и соответствующими антителами наблюдается связывание. Этот процесс положен в основу серологический реакции. Название реакций произошло от латинского слова serum(сыворотка).

Серологические реакции

Для постановки серологических реакций используют сыворотки, содержащие антитела. В серологической реакции один компонент (ингредиент) всегда известен.

Для постановки серологической реакции используют сыворотку, получаемую из крови лабораторного животного, иммунизированного коллекционным (известной видовой и штамбовой принадлежности) микроорганизмом. Такая сыворотка содержит антитела, специфичные к данному штамму. Полученная сыворотка используется в серологических реакциях для выявления родственных бактерий или других микроорганизмов, обладающих такими же антигенными элементами, как и содержащийся в сыворотке штамм.

Серологические критерии систематики – это единственные признаки, по которым идентифицируют патоген при невозможности или трудности его выделении из зараженного организма.

К серологическим реакциям, позволяющим легко и быстро идентифицировать микроорганизм, относятся: агглютинация, препинация, иммунофлюоресценция, иммуноферментный анализ, радиоиммунный анализ.

Агглютинация

Агглютинация – способность агглютинов (специфических антител) связываться с корпускулярными агглютиногенами, содержащимися в клетках бактерий и других микроорганизмов, склеивать их в агрегаты, выпадающие в осадок в присутствии электролита.Различают прямую и непрямую (пассивную) реакцию агглютинации.

Осадок может быть зернистым или крупнохлопчатым. Зернистый наблюдается при агглютинации бактерий, не имеющих жгутиков, хлопчатый – у жгутиковых бактерий.

Препинация

Реакция препинации – агрегация (объединение в одну систему) антител (преципитинов) и растворимых молекул преципиногенов.

Реакция препинации проявляется в помутнении прозрачной жидкости, появлении преципитата в виде осадка, кольца или других конфигураций.

В отличие от реакции агглютинации, антиген для реакции преципитации обязательно должен быть в молекулярном виде. Осаждение из раствора комплексов антител и антигенов происходит только при эквивалентных соотношениях концентраций взаимодействующих молекул. При избытке одного из реагентов образуется растворимый комплекс и реакция не проявляется. Преципитиноген имеет ультрамикроскопическое строение и его концентрация в единице объема сыворотки выше, чем концентрация антител. Поэтому для осаждения более легких частичек антигена с образованием видимого преципитата необходимо значительно большее количество антител.

Реакцию преципитации проводят в жидкой и твердой среде.

Иммунофлюоресценция

Реакции иммунофлюоресценции (РИФ) основаны на использовании специфичности иммунологической реакции и чувствительности флюоресцентной микроскопии. Он может быть как прямым, так и непрямым.

Один из компонентов иммунной реакции, как правило, антитела, метится (конъюгируется)флюоресцирующим красителем.

Обычно используют флюоресцеинизотиоционаты (ФИТЦ) дающее в ультрафиолетовом свете зеленое свечение и тетраметилродаминизотионат (ТРИТЦ) – оранжево-красное свечение.

С помощью РИФ выявляют и идентифицируют:

  • микроорганизмы в составе чистых и смешанных культур, в мазках- отпечатках;
  • клетки, пораженные вирусами, бактериями и другими микроорганизмами;
  • Т и В лимфоциты, нормальные киллеры и другие клетки иммунной системы.

Иммуноферментный анализ

Иммуноферметный анализ основан на использовании функционально активной биологической молекулы фермента. Комплекс иммунореагентов с ферментами сохраняет высокую специфичность иммунореагентов и способность фермента расщеплять добавленный субстрат с образованием легко обнаруживаемых продуктов. В результате появляется возможность регистрировать и учитывать количественно взаимодействие иммунореагента, например антител и антигенов.

В последнее время разработаны варианты иммуноферментного анализа, позволяющие качественно и количественно выявить иммунореагенты в жидких средах.

Радиоимунный анализ

Радиоиммунныйй анализ – высокочувствительный метод, основанный на конкурентном связывании меченного радиоактивным изотопом и немеченого антитела и антигена. Принцип метода заключается в том, что известное количество антител смешивают с известным количеством меченого антигена и исследуемой пробой (содержащей неизвестное количества антигена). Антиген, содержащийся в пробе, и стандартный меченый антиген связываются с антителами. При этом установлено, что чем выше содержание немеченого антигена, тем меньше меченого антигена свяжется с антителами. Концентрацию антигена в исследуемой пробе оценивают по уровню радиоактивности. Тот же подход используют для определения концентрации антител в пробе. В этом случае известное количество антигена смешивают с известным количеством стандартных меченых антител и исследуемой пробой.

Есть и другая модификация метода радиомимунного анализа. Она основана на иммобилизации антиген и антител на твердой подложке.

Основные недостатки метода: необходимость приобретения дорогостоящего оборудования и реактивов и обеспечение безопасность в условиях работы с радиоактивными изотопами.

(c) Справочник AgroXXI